Antimicrobial agent

ABSTRACT

The present invention relates to an antimicrobial agent for preventing, ameliorating and treating diseases attributable to  Helicobacter pylori,  for example peptic ulcer and gastritis, particularly recurring peptic ulcer and recurring gastritis, and provides (1) an antimicrobial agent comprising oxethazaine represented by the following formula as an active ingredient, (2) an antimicrobial agent comprising oxethazaine and a proton pump inhibitor as active ingredients, and (3) an antimicrobial agent comprising oxethazaine and an antibiotic as active ingredients.

FIELD OF THE INVENTION

[0001] The present invention relates to an antimicrobial agent forpreventing, ameliorating and treating diseases caused by themicroaerophilic Gram-negative spiral and short bacillus Helicobacterpylori (H. pylori), for example peptic ulcer and gastritis, particularlyrecurring peptic ulcer and gastritis.

PRIOR ART

[0002] Conventionally, a large number of medicines have been used asanti-ulcer agents for preventing, ameliorating and treating peptic ulcersuch as gastric ulcer and duodenal ulcer, and recently, histamineH₂-receptor antagonists among these medicines are mainly used. By theadvent of histamine H₂-receptor antagonists, it became possible torapidly ameliorate and treat peptic ulcer and gastritis, particularlywith respect to subjective symptoms. However, in the treatment of pepticulcer or gastritis by the conventional anti-ulcer agents containinghistamine H₂-receptor antagonists, there is the problem that ulcerrecurs highly frequently when chemotherapy is suspended after therecovery. Because the reason for this recurrence has not been revealedfor a long time, none of effective prophylactic and therapeutic methodshave been established.

[0003] Meanwhile, it was shown from 1979 onward that the microaerophilicGram-negative spiral and short bacillus H. pylori is present in gastricmucosa of patients suffering from peptic ulcer and bacterium has a closerelationship with gastritis and gastric ulcer. It, formerly classifiedas Campylobacter pylori (C. pylori), was newly designated H. pylori inre-consideration in microbial taxonomy in 1989, and thus C. pylori andH. pylori are the same bacterium although it may be referred to as C.pylori in some literatures.

[0004] As literatures showing the relationship between H. pylori andgastric ulcer or gastritis, e.g. Med. J. Aust., 142, 436-439, 1985 andAm. J. Gastroentel., 82, 192-199, 1987 reported that acute gastritisoccurred upon oral administration of H. pylori to healthy volunteers.

[0005] Further, the attention has been directed to the relationshipbetween H. pylori and gastritis or peptic ulcer, since it was alsoreported in Gastroentel., 94, 33-40, 1988 that when an antibiotic isadministered to patients suffering from peptic ulcer to eradicate H.pylori, the improvement of an image of gastric tissues is recognized.

[0006] In addition, Lancet, 1437-1442, 1988 reported that the frequencyof recurrence of peptic ulcer is high in H. pylori-positive patientssuffering from peptic ulcer as compared with H. plyori-negativepatients, and it was thus revealed that the eradication of H. pylori isessential for prevention and treatment of recurring peptic ulcer.

[0007] Further, recently, the relationship between H. pylori and thegeneration of gastric cancer has been discussed enthusiastically, andthe importance of eradication of H. pylori came to be recognized morestrongly.

[0008] As medicines capable of eradicating H. pylori, antibiotics suchas penicillin, cephalosporin, tetracycline, neuquinolone, and macrolideantibiotics, and some anti-ulcer agents such as praunotol, sofalcone,benexate hydrochloride (betadex), bismuth preparations, and a protonpump inhibitor (referred to hereinafter as PPI) may be proposed.

[0009] Among the above-mentioned known medicines capable of eradicatingH. pylori, anti-ulcer agents other than PPI have a very weak action foreradication of H. pylori, and thus the effect of these anti-ulcer agentsin eradication could not be expected in clinically ordinary doses.

[0010] On the other hand, PPI is recognized to have stronger efficacy,but the eradication of H. pylori by PPI alone is difficult.

[0011] Further, the in vitro action of the antibiotics in eradication isvery strong, but they are rapidly degraded in gastric acid because ofvery weak physical properties against acid, so there is the problem thattheir in vivo or clinical effect could not be recognized to be sosignificant as expected. Further, the antibiotics are administered foreradicating H. pylori in larger doses than clinically ordinary doses,thus causing frequently occurring side effects such as anaphylaxis anddiarrhea, and when used for a long period of time, the antibiotics bringabout many problems such as occurrence of non-recovering severe sideeffects such as impediments of organs and blood, and generation ofresistant bacteria.

[0012] As described above, medicines by which recurring peptic ulcer andgastritis attributable to H. pylori can be clinically prevented andtreated reliably and safely for a prolonged period of time, have neverbeen found yet and there has been demand for a new medicine.

[0013] The study during this period is described in e.g. Pharmacia, 32(7), 828-831, 1996, that is:

[0014] (1) The H₂-receptor antagonist did not have an antimicrobialaction on H. pylori.

[0015] (2) The degree of efficacy for H. pylori therapy by PPI alone(lansoprazole, 30 mg/day, 8 weeks) was as very low as 5%.

[0016] (3) The effect of a single antibiotic in eradication was alsovery low.

[0017] (4) Accordingly, combined therapy by multiple drugs and combinedtherapy by PPI are considered to be effective, and particular attentionis paid to combined therapy by PPI and an antibiotic; however, evencombined therapy using 2 drugs, that is, lansoprazole+clarithromycin oromeprazole+amoxicillin, did not achieve any satisfactory effect foreradication of the microorganism.

[0018] (5) Accordingly, combined therapy simultaneously using 3medicines, that is, PPI plus 2 antibiotics, has also been attemptedrecently.

[0019] Such extreme combined therapy by multiple drugs has manydisadvantages that administration for a long time is cumbersome anddifficult and occurrence of side effects is increased significantly, andthus it cannot be said that such therapy is preferable for the patient.

[0020] Under these circumstances, the development of a medicine which inan ordinary dose, exhibits a satisfactory action on eradication of H.pylori and is highly safe even when used for a long time has beencontinued.

DISCLOSURE OF THE INVENTION

[0021] Accordingly, the present inventors have conducted extensivestudies for a medicine which satisfies such requirements i.e. aclinically more potent action on eradication of H. pylori and highsafety even when administered for a prolonged period of time. As aresult, they unexpectedly found that oxethazaine, which is usedclinically widely as a local anesthetic for digestive-tract mucosa,achieved the desired object as an antimicrobial agent. Further, theyfound that a combination of oxethazaine and PPI brings about synergismor additive effect on eradication of H. pylori, thus achieving furtherpreferable therapeutic effects, while a combination of oxethazaine andan antibiotic or a H₂-receptor antagonist can lead to a reduction of thedose of the antibiotic or H ₂-receptor antagonist administered, and thuscompleted the present invention.

[0022] Accordingly, the object of the present invention is to provide anantimicrobial agent which is clinically highly effective against H.pylori, specifically a prophylactic, therapeutic and ameliorating agentfor peptic ulcer and gastritis, particularly a prophylactic, therapeuticand ameliorating agent for recurring ulcer and recurring gastritis,consequently enabling prevention of gastric cancer.

[0023] Oxethazaine according to the present invention has the chemicalname2,2′-[(2-hydroxyethyl)amino]bis[N-(1,1-dimethyl-2-phenylethyl)-N-methylacetamide],which is represented by the following formula:

[0024] Oxethazaine is used pharmacologically as a local anesthetic fordigestive-tract mucosa to treat pains, acid symptoms, nausea, emesis,stomach discomfort, an impending need to defecate etc., which areaccompanied by esophagitis, gastritis, gastric and duodenal ulcer, andcolon hypersensitivity.

[0025] Further, oxethazaine unlike antibiotics does not permitappearance of resistant bacteria, and thus it can be expected that itstherapeutic effect is stable for a prolonged period of time.

[0026] Oxethazaine can be produced by a method described in U.S. Pat.No. 2,780,646.

[0027] The present invention provides an antimicrobial agent comprisingoxethazaine as an active ingredient; an antimicrobial compositioncomprising oxethazaine and a proton pump inhibitor as activeingredients; an antimicrobial composition comprising oxethazaine and anantibiotic as active ingredients; and an antimicrobial compositioncomprising oxethazaine and a H₂-receptor antagonist or itspharmacologically acceptable salt as active ingredients.

[0028] The present invention provides a method of treating a diseaseattributable to Helicobacter pylori, which comprises the step ofadministering an effective amount of oxethazaine to a patient sufferingfrom the disease. In the present invention, oxethazaine is used forproduction of an antimicrobial agent.

[0029] In the present invention, the action of eradicating H. pylori canbe expected by use of oxethazaine alone, but when it is combined withPPI, the synergism, or additive effect of both the compounds can beexpected. Here, PPI is not particularly limited insofar as it is amedicine having a proton pump inhibitory effect. Usually, it is acompound having a benzimidazole skeleton, and specific examples includerabeprazole (I),2-[4-(3-methoxypropoxy)-3-methylpyridine-2-yl]methylthio-1H-benzimidazole(II), omeprazole (III), lansoprazole (IV) and pantoprazole (V), orpharmacologically acceptable salts thereof.

[0030] The chemical formulae of these specific examples are shown below.

[0031] It is possible to produce rabeprazole (I) and2-[4-(3-methoxypropoxy)-3-methylpyridine-2-yl]methylthio-1H-benzimidazole(II) according to the method described in JP-A 64-6270, omeprazole (III)according to the method in JP-A 54-141783, lansoprazole (IV) accordingto the method in JP-A 61-50978 and pantoprazole (V) according to themethod in JP-A 61-22079.

[0032] Additionally, in the present invention, the dose of an antibioticcan also be reduced by combined use of oxethazaine and the antibiotic.

[0033] The antibiotics in the present invention are not limited insofaras they are medicines having an antimicrobial effect, and specificexamples include e.g. penicillin antibiotics such as ampicillin (ABPC)and amoxicillin (AMPC), neuquinolone antibiotics such as ofloxacin(OFLX), macrolide antibiotics such as erythromycin (EM), roxithromycin(RXM) and clarithromycin (CAM), tetracycline antibiotics such asminocycline(MINO), antitrichomonas such as metronidazole. These may beused singly or in combination thereof.

[0034] Further, in the present invention, oxethazaine is combined with aH₂-receptor antagonist or its pharmacologically acceptable salt, wherebythe synergism, or additive effect of both the compounds can be expected.Here, the H₂-receptor antagonist means histamine H₂-receptor antagonist,and specific examples include cimetidine, ranitidine hydrochloride,famotidine etc.

[0035] In the present invention, the pharmacologically acceptable saltincludes e.g. addition salts of inorganic acids, such as hydrochloride,sulfate, nitrate, phosphate, hydrobromate, hydriodate and perchlorate,addition salts of organic acids, such as oxalate, maleate, fumarate,succinate, methane sulfonate, benzene sulfonate, p-toluene sulfonate andcamphor sulfonate, and addition salts of metals, such as sodium salt,potassium salt, calcium salt and magnesium salt. Among these, morepreferable salts include sodium salt as the proton pump inhibitor, andhydrochloride as the H₂-receptor antagonist.

[0036] Accordingly, an object of the present invention is to provide anantimicrobial agent having H. pylori-eradicating action equal to orhigher than that of antibiotics, being highly safe even whenadministered for a long time, and having clinically excellent usefulnessfor peptic ulcer and gastritis, particularly for recurring ulcer orrecurring gastritis, consequently enabling prevention of gastric cancer.

[0037] Further, it is also an object of the present invention to reducethe dose of PPI, an antibiotic or a H₂-receptor antagonist by combiningoxethazaine with PPI, the antibiotic or the H₂-receptor antagonist, thuspreventing and/or reducing side effects or improving compliance.

BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0038]FIG. 1 is a graph showing the sterilizing effect (change withtime) of oxethazaine on H. pylori NCTC 11637 (standard strain);

[0039]FIG. 2 is a graph showing the sterilizing effect (change withtime) of oxethazaine on H. pylori NCTC 11916 (standard strain);

[0040]FIG. 3 is a graph showing the sterilizing effect (change withtime) of oxethazaine on H. pylori EH 12 (clinically separated strain);and

[0041]FIG. 4 is a graph showing the sterilizing effect (change withtime) of an antibiotic (ampicillin) on H. pylori NCTC 11637 (standardstrain).

[0042] Hereinafter, examples of antimicrobial activity tests are givento demonstrate the effect of the present invention.

ANTIMICROBIAL ACTIVITY TEST 1 Anti-H. pylori Activity of a SingleCompound

[0043] 1. Method

[0044] The in vitro antimicrobial activity of each of the following testcompounds on 25 kinds of H. pylori strains i.e. standard strains andclinically separated strains (derived from gastric mucosa) was evaluatedby the standard method (agar plate method) according to the ChemotherapySociety of Japan.

[0045] That is, the test plate agar medium used was Brucella agar (BBLMicrobiology Systems™ manufactured by Vector Dickinson & Co.) to whichhorse fiber-free blood had been added at a concentration of 7%, andcultured at 37° C., pH 7.0 for 3 days under slightly aerobic conditions(Canpipack™ manufactured by Vector Dickinson & Co.) to judge whether thegrowth was inhibited or not at each concentration (μg/ml) of the testcompound.

[0046] 2. Test Compounds

[0047] (1) Oxethazaine

[0048] (2)2-[4-(3-Methoxypropoxy)-3-methylpyridine-2-yl]methylthio-1H-benzimidazole(II)

[0049] (3) Omeprazole (III)

[0050] (4) Lansoprazole (IV)

[0051] For use, each of the above-mentioned test compounds was dissolvedin a 1% aqueous solution of N,N-dimethyl sulfoxide (DMSO).

[0052] 3. Results

[0053] The results are shown below. Among the test strains in the table,NCTC 11637, NCTC 11639 and NCTC 11916 are standard strains, and theothers are clinically separated strains. Compound Strain No. Oxethazaine(II) (III) (IV) NCTC11637 25 1.56 50 12.5 NCTC11639 50 0.8 25 3.13NCTC11916 25 1.56 50 6.25 EH12 25 0.8 25 3.13 EH13 25 0.8 25 3.13 EH1625 0.8 25 3.13 EH26 25 1.56 25 6.25 90-384 25 1.56 50 3.13 90-390 25 0.850 3.13 89-357 25 0.8 50 6.25 90-428 25 1.56 50 6.25 89-360 25 1.56 506.25 89-360 (1) 25 1.56 — 6.25 90-407 25 1.56 25 3.13 90-411 25 0.8 253.13 89-355 12.5 1.56 25 3.13 90-397 25 1.56 25 3.13 90-388 25 1.56 503.13 90-407 (1) 25 0.8 — 6.25 90-388 (1) 25 0.8 25 6.25 90-390 (1) 250.8 25 6.25 90-414 25 0.8 50 6.25 90-397 25 0.8 25 6.25 90-414 (1) 250.8 25 6.25 90-392 25 0.8 25 6.25

[0054] From the results of the antimicrobial activity test 1 describedabove, it is evident that the oxethazaine according to the presentinvention has excellent anti-H. pylori activity.

[0055] The clinical dose of oxethazaine administered as a localanesthetic for digestive-tract mucosa is comparatively high (15 to 40mg/day), and thus the concentration of oxethazaine in gastric juice(which is secreted in an amount of about 500 ml/day) is 30 to 80 μg/ml,which exceeds MIC (about 25 μg/ml) for each strain confirmed in Table 1.Accordingly, satisfactory pharmacological effect can be expected even byuse of oxethazaine alone.

ANTIMICROBIAL ACTIVITY TEST 2 Comparison of Oxethazaine and anAntibiotic in Time for Sterilizing H. pylori

[0056] 1. Method

[0057] NCTC 11637 and NCTC 11916 (standard strains) and EH 12(clinically separated strain) were used as test strains.

[0058] A solution of the test compound was added to Brucella brothcontaining 5% fetal bovine serum, cultured under slightly aerobicconditions at 37° C., and the vial microbe cell number in Brucella agarcontaining 7% horse blood was counted at predetermined intervals.

[0059] 2. Test Compounds

[0060] (1) Oxethazaine

[0061] (2) Ampicillin (ABPC)

[0062] The above compound (1) was dissolved in a 1% aqueous solution ofN,N-dimethyl sulfoxide (DMSO), and the above compound (2) was dissolvedin water to prepare a solution of each test compound.

[0063] 3. Results

[0064] The results are shown below (see FIGS. 1 to 4).

[0065] “cfu” in Tables and Figures means “colony forming unit”.

[0066] (1) The sterilizing effect of oxethazaine on NCTC 11637 (seeViable microbe cell number (log₁₀cfu/ml) Concentration 0 h 3 h 6 h 9 h24 h Control 5.70 5.43 5.36 5.68 6.68 ½ MIC 5.70 5.48 5.27 5.11 5.51 1MIC 5.70 5.24 4.98 4.64 4.30 2 MIC 5.70 1.90 0 0 0 4 MIC 5.70 0 0 0 0

[0067] (2) The sterilizing effect of oxethazaine on NCTC 11916 (seeViable microbe cell number (log₁₀cfu/ml) Concentration 0 h 3 h 6 h 9 h24 h Control (solvent) 5.77 5.88 6.21 6.78 8.00 Control (medium) 5.726.40 6.70 7.12 8.38 ½ MIC 5.77 5.70 6.35 6.32 6.44 1 MIC 5.72 6.04 5.925.84 4.67 2 MIC 5.77 3.63 2.83 2.61 0 4 MIC 5.77 0 0 0 0

[0068] Viable microbe cell number (log₁₀cfu/ml) Concentration 0 h 3 h 6h 9 h 24 h Control (solvent) 5.60 5.48 5.63 5.90 6.97 Control (medium)5.60 5.74 5.78 6.00 7.18 ½ MIC 5.60 5.77 5.19 5.71 5.27 1 MIC 5.60 5.675.61 5.68 4.51 2 MIC 5.60 1.78 0 0 0 4 MIC 5.60 0 0 0 0

[0069] (4) The sterilizing effect of ampicillin on NCTC 11637 (see FIG.4) Viable microbe cell number (log₁₀cfu/ml) Concentration 0 h 3 h 6 h 24h Control 6.25 6.71 6.90 7.94 1 MIC 6.25 5.51 4.49 3.48 2 MIC 6.25 5.304.41 3.00 4 MIC 6.25 4.95 4.20 2.48

[0070] As is evident from the above results and FIGS. 1 to 4, theantibiotic shows a gentle sterilization curve, whereas oxethazaineaccording to the present invention shows a rapidly droppingsterilization curve.

[0071] This suggests that oxethazaine is more immediate-acting inexhibiting clinical sterilizing effect than the antibiotic, and ascompared with the antibiotic, the excellent effect of the presentinvention is evident.

ANTIMICROBIAL ACTIVITY TEST 3 Anti-H. pylori Activity of OxethazaineUsed in Combination with Compound (II)

[0072] 1. Method

[0073] The effect of oxethazaine used in combination with compound (II)(2-[4-(3-methoxypropoxy)-3-methylpyridine-2-yl]methylthio-1H-benzimidazole)was examined in the same manner as in antimicrobial activity test 1,using a checker board method.

[0074] 2. Results

[0075] Hereinafter, the results are shown for each strain.

[0076] In each Table, the concentration of oxethazaine is shownvertically, and the concentration of compound (II) is shownhorizontally.

[0077] In each Table, “−” indicates the inhibited growth of H. pylori(presence of antimicrobial activity), and “+” indicates the growth of H.pylori (absence of antimicrobial activity).

[0078] The synergism or additive effect in the present invention has thefollowing meanings.

[0079] (1) Synergism

[0080] It is assumed to be present when the MICs of both oxethazaine andPPI are reduced by ¼ or more (when anti-H. pylori activity is recognizedeven when the concentrations of both oxethazaine and PPI are reduced to¼.).

[0081] (2) Additive Effect

[0082] It is assumed to be present when the MIC of either oxethazaine orPPI is reduced by ½ (when anti-H. pylori activity is not recognized whenthe concentrations of both oxethazaine and PPI are reduced to ¼, butanti-H. pylori activity is recognized when the concentration of onecompound is reduced to ¼ and simultaneously the concentration of theother compound is reduced to ½.). TABLE 1 NCTC11637 (additive effect)Oxethazaine Compound (II) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.13 1.560.8 0.4 0.2 0.1 0 100 − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − −25 − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − + + + 6.25 − − − − − −− − + + + + 3.13 − − − − − − − − + + + + 0 − − − − − − − + + + +

[0083] In Table 1 above, a row of 25 (μg/ml) corresponds to the MIC ofoxethhazaine alone on NCTC 11637, and a row of 1.56 (μg/ml) correspondsto the MIC of compound (II) alone on the same strain.

[0084] At the concentration (6.25 μg/ml) of ¼ relative to the MIC ofthazaine alone and at the concentration (0.4 μg/ml) of ¼ relative to theMIC of compound (II) alone, no anti-H. pylori activity was recognized.

[0085] However, when one of them was present at the concentration of ¼the other at the concentration of ½, anti-H. pylori as recognized.

[0086] Accordingly, when oxethazaine and compound (II) were used incombination, their additive effect on the above strain was recognized.TABLE 2 NCTC11639 (synergism) Oxethazaine Compound (II) (μg/ml) (μg/ml)100 50 25 12.5 6.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0 100 − − − − − − − − − −− − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − + 12.5 − − − − −− − − − − + + 6.25 − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − − − − − − + + +0 − − − − − − − − + + +

[0087] Next, in Table 2 above, a row of 50 (μg/ml) corresponds to theMIC of oxethazaine alone on NCTC 11639, and a row of 0.8 (μg/mlcorresponds to the MIC of compound (II) alone on the same.

[0088] At the concentration (12.5 μg/ml) of ¼ relative to the MIC ofoxethazaine alone and at the concentration (0.2 μg/ml) of ¼ relative tothe MIC of compound (II) alone, anti-H. pylori activity was recognized.

[0089] Accordingly, when oxethazaine and compound (II) were used incombination, their synergism on the above strain was recognized.

[0090] Then, the effect of combined use was evaluated in the samemanner. TABLE 3 Oxethazaine Compound (II) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0 NCTC11916 (additive effect) 100 − − − −− − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − −12.5 − − − − − − − − − − + + 6.25 − − − − − − − − + + + + 3.13 − − − − −− − − + + + + 0 − − − − − − − + + + + EH 12 (additive effect) 100 − − −− − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − −12.5 − − − − − − − − − − + + 6.25 − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − −− − − + + + + 0 − − − − − − − − + + + EH 13 (synergism) 100 − − − − − −− − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5 −− − − − − − − − − − + 6.25 − − − − − − − − − − + + 3.13 − − − − − − − −− + + + 0 − − − − − − − − + + +

[0091] TABLE 4 Oxethazaine Compound (II) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0 EH 16 (additive effect) 100 − − − − − −− − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5 −− − − − − − − − + + + 6.25 − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − − − −− + + + + 0 − − − − − − − − + + + EH 26 (additive effect) 100 − − − − −− − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5− − − − − − − − − − + + 6.25 − − − − − − − − + + + + 3.13 − − − − − − −− + + + + 0 − − − − − − − + + + + 90-384 (additive effect) 100 − − − − −− − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5− − − − − − − − + + + + 6.25 − − − − − − − − + + + + 3.13 − − − − − − −− + + + + 0 − − − − − − − + + + +

[0092] TABLE 5 Oxethazaine Compound (II) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0 90-390 (additive effect) 100 − − − − −− − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5− − − − − − − − − − − + 6.25 − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − − − −− + + + + 0 − − − − − − − − + + + 89-357 (additive effect) 100 − − − − −− − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5− − − − − − − − − − + + 6.25 − − − − − − − − + + + + 3.13 − − − − − − −− + + + + 0 − − − − − − − − + + + 90-428 (additive effect) 100 − − − − −− − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5− − − − − − − − − − + + 6.25 − − − − − − − − + + + + 3.13 − − − − − − −− + + + + 0 − − − − − − − + + + +

[0093] TABLE 6 Oxethazaine Compound (II) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0 89-360 (additive effect) 100 − − − − −− − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5− − − − − − − − − + + + 6.25 − − − − − − − − + + + + 3.13 − − − − − − −− + + + + 0 − − − − − − − + + + + 89-360(1) (additive effect) 100 − − −− − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − −12.5 − − − − − − − − − + + + 6.25 − − − − − − − − + + + + 3.13 − − − − −− − − + + + + 0 − − − − − − − + + + + 90-407 (additive effect) 100 − − −− − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − −12.5 − − − − − − − − − + + + 6.25 − − − − − − − − + + + + 3.13 − − − − −− − − + + + + 0 − − − − − − − + + + +

[0094] TABLE 7 Oxethazaine Compound (II) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0 90-411 (additive effect) 100 − − − − −− − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5− − − − − − − − − − − + 6.25 − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − − − −− − + + + 0 − − − − − − − − + + + 89-355 (synergism) 100 − − − − − − − −− − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5 − − −− − − − − − − − − 6.25 − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − − − − −− + + + 0 − − − − − − − + + + + 90-397 (additive effect) 100 − − − − − −− − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5 −− − − − − − − − + + + 6.25 − − − − − − − − + + + + 3.13 − − − − − − −− + + + + 0 − − − − − − − + + + +

[0095] TABLE 8 Oxethazaine Compound (II) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0 90-388 (additive effect) 100 − − − − −− − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5− − − − − − − − − − + + 6.25 − − − − − − − − + + + + 3.13 − − − − − − −− + + + + 0 − − − − − − − + + + + 90-407(1) (additive effect) 100 − − −− − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − −12.5 − − − − − − − − − − + + 6.25 − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − −− − − − + + + 0 − − − − − − − − + + + 90-388(1) (additive effect) 100 −− − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − −− − 12.5 − − − − − − − − − − + + 6.25 − − − − − − − − − + + + 3.13 − − −− − − − − − + + + 0 − − − − − − − − + + +

[0096] TABLE 9 Oxethazaine Compound (II) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0 90-390(1) (additive effect) 100 − − − −− − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − −12.5 − − − − − − − − − − + + 6.25 − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − −− − − − + + + 0 − − − − − − − − + + + 90-414 (additive effect) 100 − − −− − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − −12.5 − − − − − − − − − − + + 6.25 − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − −− − − − + + + 0 − − − − − − − − + + + 90-397 (synergism) 100 − − − − − −− − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5 −− − − − − − − − − − + 6.25 − − − − − − − − − − + + 3.13 − − − − − − − −− + + + 0 − − − − − − − − + + +

[0097] TABLE 10 Oxethazaine Compound (II) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0 90-414(1) (additive effect) 100 − − − −− − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − −12.5 − − − − − − − − − − − + 6.25 − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − −− − − − + + + 0 − − − − − − − − + + + 90-392 (synergism) 100 − − − − − −− − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5 −− − − − − − − − − − + 6.25 − − − − − − − − − − + + 3.13 − − − − − − − −− − + + 0 − − − − − − − − + + +

ANTIMICROBIAL ACTIVITY TEST 4 Anti-H. pylori Activity of OxethazaineUsed in Combination with Compound (III)

[0098] 1. Method

[0099] The effect of oxethazaine used in combination with compound (III)(omeprazole) was examined in the same manner as in antimicrobialactivity test 1, using the checker board method.

[0100] 2. Results

[0101] Hereinafter, the results are shown for each strain in the samemanner as in antimicrobial activity test 3. TABLE 11 OxethazaineCompound (III) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.13 0 NCTC 11637(additive effect) 100 − − − − − − − 50 − − − − − − − 25 − − − − − − −12.5 − − − − + + + 6.25 − − − + + + + 3.13 − − + + + + + 0 − − + + + +NCTC 11639 (additive effect) 100 − − − − − − − 50 − − − − − − − 25 − − −− − − + 12.5 − − − − + + + 6.25 − − − + + + + 3.13 − − − + + + + 0 − −− + + + NCTC 11916 (additive effect) 100 − − − − − − − 50 − − − − − − −25 − − − − − − − 12.5 − − − − + + + 6.25 − − − + + + + 3.13 −− + + + + + 0 − − + + + +

[0102] TABLE 12 Oxethazaine Compound (III) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 2512.5 6.25 3.13 0 EH 12 (additive effect) 100 − − − − − − − 50 − − − − −− − 25 − − − − − − − 12.5 − − − − − + + 6.25 − − − − + + + 3.13 − −− + + + + 0 − − − + + + EH 13 (additive effect) 100 − − − − − − − 50 − −− − − − − 25 − − − − − − − 12.5 − − − − − − + 6.25 − − − − + + + 3.13 −− − − + + + 0 − − − + + + EH 16 (additive effect) 100 − − − − − − − 50 −− − − − − − 25 − − − − − − − 12.5 − − − − + + + 6.25 − − − + + + + 3.13− − − + + + + 0 − − − + + +

[0103] TABLE 13 Oxethazaine Compound (III) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 2512.5 6.25 3.13 0 EH 26 (additive effect) 100 − − − − − − − 50 − − − − −− − 25 − − − − − − − 12.5 − − − − + + + 6.25 − − − + + + + 3.13 − −− + + + + 0 − − − + + + 90-384 (additive effect) 100 − − − − − − − 50 −− − − − − − 25 − − − − − − − 12.5 − − − − + + + 6.25 − − − + + + + 3.13− − − + + + + 0 − − + + + + 90-390 (additive effect) 100 − − − − − − −50 − − − − − − − 25 − − − − − − − 12.5 − − − − − + + 6.25 − − − + + + +3.13 − − − + + + + 0 − − + + + +

[0104] TABLE 14 Oxethazaine Compound (III) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 2512.5 6.25 3.13 0 89-357 (additive effect) 100 − − − − − − − 50 − − − − −− − 25 − − − − − − − 12.5 − − − − + + + 6.25 − − − + + + + 3.13 − −− + + + + 0 − − + + + + 90-428 (additive effect) 100 − − − − − − − 50 −− − − − − − 25 − − − − − − − 12.5 − − − − + + + 6.25 − − − + + + + 3.13− − + + + + + 0 − − + + + + 89-360 (additive effect) 100 − − − − − − −50 − − − − − − − 25 − − − − − − − 12.5 − − − − + + + 6.25 − − − + + + +3.13 − − + + + + + 0 − − + + + +

[0105] TABLE 15 Oxethazaine Compound (III) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 2512.5 6.25 3.13 0 90-407 (additive effect) 100 − − − − − − − 50 − − − − −− − 25 − − − − − − − 12.5 − − − − + + + 6.25 − − − − + + + 3.13 − −− + + + + 0 − − − + + + 90-411 (additive effect) 100 − − − − − − − 50 −− − − − − − 25 − − − − − − − 12.5 − − − − − − + 6.25 − − − − + + + 3.13− − − + + + + 0 − − − + + + 9-355 (additive effect) 100 − − − − − − − 50− − − − − − − 25 − − − − − − − 12.5 − − − − − − − 6.25 − − − − + + +3.13 − − − + + + + 0 − − − + + +

[0106] TABLE 16 Oxethazaine Compound (III) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 2512.5 6.25 3.13 0 90-397 (additive effect) 100 − − − − − − − 50 − − − − −− − 25 − − − − − − − 12.5 − − − − + + + 6.25 − − − + + + + 3.13 − −− + + + + 0 − − − + + + 90-388 (additive effect) 100 − − − − − − − 50 −− − − − − − 25 − − − − − − − 12.5 − − − − + + + 6.25 − − − + + + + 3.13− − − + + + + 0 − − + + + + 90-388(1) (additive effect) 100 − − − − − −− 50 − − − − − − − 25 − − − − − − − 12.5 − − − − − + + 6.25 − − −− + + + 3.13 − − − + + + + 0 − − − + + +

[0107] TABLE 17 Oxethazaine Compound (III) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 2512.5 6.25 3.13 0 90-390(1) (additive effect) 100 − − − − − − − 50 − − −− − − − 25 − − − − − − − 12.5 − − − − + + + 6.25 − − − − + + + 3.13 − −− + + + + 0 − − − + + + 90-414 (synergism) 100 − − − − − − − 50 − − − −− − − 25 − − − − − − − 12.5 − − − − − + + 6.25 − − − − + + + 3.13 − −− + + + + 0 − − + + + + 90-397 (additive effect) 100 − − − − − − − 50 −− − − − − − 25 − − − − − − − 12.5 − − − − − + + 6.25 − − − − + + + 3.13− − − − + + + 0 − − − + + +

[0108] TABLE 18 Oxethazaine Compound (III) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 2512.5 6.25 3.13 0 90-414(1) (additive effect) 100 − − − − − − − 50 − − −− − − − 25 − − − − − − − 12.5 − − − − − + + 6.25 − − − − + + + 3.13 − −− − + + + 0 − − − + + + 90-392 (additive effect) 100 − − − − − − − 50 −− − − − − − 25 − − − − − − − 12.5 − − − − + + + 6.25 − − − − + + + 3.13− − − − + + + 0 − − − + + +

ANTIMICROBIAL ACTIVITY TEST 5 Anti-H. pylori Activity of OxethazaineUsed in Combination with Compound (IV)

[0109] 1. Method

[0110] The effect of oxethazaine used in combination with compound (IV)(lansoprazole) was examined in the same manner as in antimicrobialactivity test 1, using the checker board method.

[0111] 2. Results

[0112] Hereinafter, the results are shown for each strain in the samemanner as in antimicrobial activity test 3. TABLE 19 OxethazaineCompound (IV) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.20.1 0 NCTC 11637 (additive effect) 100 − − − − − − − − − − − − 50 − − −− − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − −− + + + + + + 6.25 − − − − − + + + + + + + 3.13 − − − − − + + + + + + +0 − − − − + + + + + + + NCTC 11639 (additive effect) 100 − − − − − − − −− − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5 − − −− − − − + + + + + 6.25 − − − − − − + + + + + + 3.13 − − − − −− + + + + + + 0 − − − − − − + + + + + NCTC 11916 (additive effect) 100 −− − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − −− − 12.5 − − − − − − − + + + + + 6.25 − − − − − − + + + + + + 3.13 − − −− − + + + + + + + 0 − − − − − + + + + + +

[0113] TABLE 20 Oxethazaine Compound (IV) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0 EH 12 (additive effect) 100 − − − − − −− − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5 −− − − − − − − + + + + 6.25 − − − − − − − + + + + + 3.13 − − − − −− + + + + + + 0 − − − − − − + + + + + EH 13 (additive effect) 100 − − −− − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − −12.5 − − − − − − − − + + + + 6.25 − − − − − − − + + + + + 3.13 − − − − −− − + + + + + 0 − − − − − − + + + + + EH 16 (additive effect) 100 − − −− − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − −12.5 − − − − − − − − + + + + 6.25 − − − − − − − + + + + + 3.13 − − − − −− + + + + + + 0 − − − − − − + + + + +

[0114] TABLE 21 Oxethazaine Compound (IV) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0 EH 26 (additive effect) 100 − − − − − −− − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5 −− − − − − − − + + + + 6.25 − − − − − − + + + + + + 3.13 − − − − −− + + + + + + 0 − − − − − + + + + + + 90-384 (additive effect) 100 − − −− − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − −12.5 − − − − − − − + + + + + 6.25 − − − − − − + + + + + + 3.13 − − − − −− + + + + + + 0 − − − − − − + + + + + 90-390 (synergism) 100 − − − − − −− − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − + + + 12.5 −− − − − − − − + + + + 6.25 − − − − − − + + + + + + 3.13 − − − − −− + + + + + + 0 − − − − − − + + + + +

[0115] TABLE 22 Oxethazaine Compound (IV) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0 89-357 (additive effect) 100 − − − − −− − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5− − − − − − − − + + + + 6.25 − − − − − − − + + + + + 3.13 − − − − − −− + + + + + 0 − − − − − + + + + + + 90-428 (synergism) 100 − − − − − − −− − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − + + + 12.5 − −− − − − − + + + + + 6.25 − − − − − − + + + + + + 3.13 − − − − −− + + + + + + 0 − − − − − + + + + + + 89-360 (synergism) 100 − − − − − −− − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − + + + 12.5 −− − − − − − + + + + + 6.25 − − − − − − + + + + + + 3.13 − − − −− + + + + + + + 0 − − − − − + + + + + +

[0116] TABLE 23 Oxethazaine Compound (IV) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0 89-360(1) (synergism) 100 − − − − − − −− − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − + + + 12.5 − −− − − − − − + + + + 6.25 − − − − − − + + + + + + 3.13 − − − −− + + + + + + + 0 − − − − − + + + + + + 90-407 (additive effect) 100 − −− − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − −− 12.5 − − − − − − − − − − + + 6.25 − − − − − − − + + + + + 3.13 − − − −− − + + + + + + 0 − − − − − − + + + + + 90-411 (additive effect) 100 − −− − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − −− 12.5 − − − − − − − − − − + + 6.25 − − − − − − − + + + + + 3.13 − − − −− − + + + + + + 0 − − − − − − + + + + +

[0117] TABLE 24 Oxethazaine Compound (IV) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0 89-355 (additive effect) 100 − − − − −− − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5− − − − − − − + + + + + 6.25 − − − − − − + + + + + + 3.13 − − − − −− + + + + + + 0 − − − − − − + + + + + 90-397 (additive effect) 100 − − −− − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − + +12.5 − − − − − − − + + + + + 6.25 − − − − − − − + + + + + 3.13 − − − − −− + + + + + + 0 − − − − − − + + + + + 90-388 (additive effect) 100 − − −− − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − + +12.5 − − − − − − − + + + + + 6.25 − − − − − − + + + + + + 3.13 − − − − −− + + + + + + 0 − − − − − − + + + + +

[0118] TABLE 25 Oxethazaine Compound (IV) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0 90-407(1) (additive effect) 100 − − − −− − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − −12.5 − − − − − − − − + + + + 6.25 − − − − − − + + + + + + 3.13 − − − − −− + + + + + + 0 − − − − − + + + + + + 90-388(1) (synergism) 100 − − − −− − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − −12.5 − − − − − − − − + + + + 6.25 − − − − − − − + + + + + 3.13 − − − − −− + + + + + + 0 − − − − − + + + + + + 90-390(1) (synergism) 100 − − − −− − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − −12.5 − − − − − − − − − + + + 6.25 − − − − − − − + + + + + 3.13 − − − − −− + + + + + + 0 − − − − − + + + + + +

[0119] TABLE 26 Oxethazaine Compound (IV) (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0 90-414 (synergism) 100 − − − − − − − −− − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5 − − −− − − − − − + + + 6.25 − − − − − − − + + + + + 3.13 − − − − − −− + + + + + 0 − − − − − + + + + + + 90-397 (synergism) 100 − − − − − − −− − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5 − −− − − − − − − + + + 6.25 − − − − − − − + + + + + 3.13 − − − − − −− + + + + + 0 − − − − − + + + + + + 90-414(1) (synergism) 100 − − − − −− − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − 12.5− − − − − − − − − + + + 6.25 − − − − − − − − + + + + 3.13 − − − − − −− + + + + + 0 − − − − − + + + + + +

[0120] TABLE 27 90-392 (additive effect) Oxethazaine Compound (IV)(μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0 100 − −− − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − −− 12.5 − − − − − − − + + + + + 6.25 − − − − − − + + + + + + 3.13 − − − −− − + + + + + + 0 − − − − − + + + + + +

[0121] As is evident from the results of antimicrobial activity tests 3to 4 mentioned above, further synergism and additive effect for anti-H.pylori activity were recognized when oxethazaine was used in combinationwith PPI.

[0122] The results are shown in the following Table. Compound (II) (III)(IV) syner-  5 strains/25 strains  1 strains/23 strains 10 strains/25strains gism additive 20 strains/25 strains 22 strains/23 strains 15strains/25 strains effect

[0123] From these results, the further excellent H. pylori-eradicatingeffect of the present invention comprising combined use of oxethazaineand PPI is evident, and the dose of PPI administered can also be reducedwhen both the compounds are used in combination.

ANTIMICROBIAL ACTIVITY TEST 6 AntiH. pylori Activity of Oxethazaine Usedin Combination with an Antibiotic

[0124] 1. Method

[0125] The effect of combined use with amoxicillin (AMPC),clarithromycin (CAM) or roxithromycin (RXM) was examined in the samemanner as in antimicrobial activity test 1, using the checker boardmethod.

[0126] 2. Results

[0127] Hereinafter, the results are shown for each strain in the samemanner as in antimicrobial activity test 3.

[0128] 1) Amoxicillin (AMPC) TABLE 28 Oxethazaine AMPC (μg/ml) (μg/ml)100 50 25 12.5 6.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.024 0.012 0.006 0NCTC11637 (additive effect) 100 − − − − − − − − − − − − − − − − 50 − − −− − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − −− − − − − − − − − − − + + 6.25 − − − − − − − − − − − − − + + + 3.13 − −− − − − − − − − − − − + + + 0 − − − − − − − − − − − − − + + NCTC11639(additive effect) 100 − − − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − −− − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − −− − − − − − + + 6.25 − − − − − − − − − − − − − − + + 3.13 − − − − − − −− − − − − − − + + 0 − − − − − − − − − − − − − + +

[0129] TABLE 29 Oxethazaine AMPC (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.253.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.024 0.012 0.006 0 NCTC11916 (additiveeffect) 100 − − − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − −− − − 25 − − − − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − −− + + 6.25 − − − − − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − − − − − − − − −− + + + 0 − − − − − − − − − − − − − + + NCTC49503 (additive effect) 100− − − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 −− − − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − − + + 6.25− − − − − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − − − − − − − − − − + + + 0 −− − − − − − − − − − − − + +

[0130] TABLE 30 Oxethazaine AMPC (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.253.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.024 0.012 0.006 0 EH 13 (additiveeffect) 100 − − − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − −− − − 25 − − − − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − −− − + 6.25 − − − − − − − − − − − − − − − + 3.13 − − − − − − − − − − − −− − + + 0 − − − − − − − − − − − − − − + EH 16 (additive effect) 100 − −− − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 − − −− − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − − + + 6.25 − −− − − − − − − − − − − − + + 3.13 − − − − − − − − − − − − − + + + 0 − − −− − − − − − − − − − + +

[0131] TABLE 31 Oxethazaine AMPC (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.253.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.024 0.012 0.006 0 EH 26 (additiveeffect) 100 − − − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − −− − − 25 − − − − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − −− − + 6.25 − − − − − − − − − − − − − − − + 3.13 − − − − − − − − − − − −− − − + 0 − − − − − − − − − − − − − − + 89-357 (additive effect) 100 − −− − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 − − −− − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − − + + 6.25 − −− − − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − − − − − − − − − − + + + 0 − − −− − − − − − − − − − + +

[0132] TABLE 32 Oxethazaine AMPC (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.253.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.024 0.012 0.006 0 90-388 (additiveeffect) 100 − − − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − −− − − 25 − − − − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − −− + + 6.25 − − − − − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − − − − − − − − −− + + + 0 − − − − − − − − − − − − − + + 90-390 (additive effect) 100 − −− − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 − − −− − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − − + + 6.25 − −− − − − − − − − − − − − + + 3.13 − − − − − − − − − − − − − − + + 0 − − −− − − − − − − − − − + +

[0133] TABLE 33 Oxethazaine AMPC (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.253.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.024 0.012 0.006 0 90-392 (additiveeffect) 100 − − − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − −− − − 25 − − − − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − −− + + 6.25 − − − − − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − − − − − − − −− + + + + 0 − − − − − − − − − − − − + + + 90-397 (additive effect) 100 −− − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 − −− − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − + + + + 6.25 −− − − − − − − − − − − + + + + 3.13 − − − − − − − − − − − + + + + + 0 − −− − − − − − − − − + + + +

[0134] TABLE 34 Oxethazaine AMPC (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.253.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.024 0.012 0.006 0 90-407 (additiveeffect) 100 − − − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − −− − − 25 − − − − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − −− + + + 6.25 − − − − − − − − − − − − + + + + 3.13 − − − − − − − − − − −− + + + + 0 − − − − − − − − − − − − + + + 90-414 (additive effect) 100 −− − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 − −− − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − + + + + + 6.25 −− − − − − − − − − − + + + + + 3.13 − − − − − − − − − − − + + + + + 0 − −− − − − − − − − + + + + +

[0135] TABLE 35 90-428 (additive effect) Oxethazaine AMPC (μg/ml)(μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.024 0.0120.006 0 100 − − − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − −− − − 25 − − − − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − −− + + + 6.25 − − − − − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − − − − − − − −− + + + + 0 − − − − − − − − − − − − + + +

[0136] 2) Clarithromycin (CAM) TABLE 36 Oxethazaine CAM (μg/ml) (μg/ml)100 50 25 12.5 6.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.024 0.012 0.006 0NCTC11637 (additive effect) 100 − − − − − − − − − − − − − − − − 50 − − −− − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − −− − − − − − − − − − − − − 6.25 − − − − − − − − − − − − − − + + 3.13 − −− − − − − − − − − − − + + + 0 − − − − − − − − − − − − + + + NCTC11639(additive effect) 100 − − − − − − − − − − − − − − − − 100 − − − − − − −− − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − −− − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − + + + 6.25 − − − − − − −− − − − − + + + + 3.13 − − − − − − − − − − − − + + + + 0 − − − − − − − −− − − + + + +

[0137] TABLE 37 Oxethazaine CAM (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.131.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.024 0.012 0.006 0 NCTC11916 (synergism) 100− − − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 −− − − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − − − + 6.25− − − − − − − − − − − − − − + + 3.13 − − − − − − − − − − − − − + + + 0 −− − − − − − − − − − − + + + ATCC49503 (additive effect) 100 − − − − − −− − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − −− − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − − − + 6.25 − − − − − −− − − − − − − − + + 3.13 − − − − − − − − − − − − − − + + 0 − − − − − − −− − − − − − + +

[0138] TABLE 38 Oxethazaine CAM (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.131.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.024 0.012 0.006 0 EH 12 (synergism) 100 − −− − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 − − −− − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − − − − 6.25 − −− − − − − − − − − − − − + + 3.13 − − − − − − − − − − − − − − + + 0 − − −− − − − − − − − − + + + EH 13 (additive effect) 100 − − − − − − − − − −− − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − −− − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − − − + 6.25 − − − − − − − − − −− − − − + + 3.13 − − − − − − − − − − − − − − + + 0 − − − − − − − − − − −− − + +

[0139] TABLE 39 Oxethazaine CAM (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.131.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.024 0.012 0.006 0 EH 16 (additive effect)100 − − − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − −25 − − − − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − − − +6.25 − − − − − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − − − − − − − −− + + + + 0 − − − − − − − − − − − − + + + EH 26 (additive effect) 100 −− − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 − −− − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − − + + 6.25 −− − − − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − − − − − − − − − + + + + 0 − −− − − − − − − − − − + + +

[0140] TABLE 40 Oxethazaine CAM (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.131.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.024 0.012 0.006 0 89-355 (additive effect)100 − − − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − −25 − − − − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − − − −6.25 − − − − − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − − − − − − − −− + + + + 0 − − − − − − − − − − − + + + + 89-357 (additive effect) 100 −− − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 − −− − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − − − + 6.25 −− − − − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − − − − − − − − − − + + + 0 − −− − − − − − − − − − + + +

[0141] TABLE 41 Oxethazaine CAM (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.131.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.024 0.012 0.006 0 90-360 (additive effect)100 − − − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − −25 − − − − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − + + +6.25 − − − − − − − − − − − − + + + + 3.13 − − − − − − − − − − −− + + + + 0 − − − − − − − − − − − − + + + 90-384 (additive effect) 100 −− − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 − −− − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − − − − 6.25 −− − − − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − − − − − − − − − + + + + 0 − −− − − − − − − − − − + + + +

[0142] TABLE 42 Oxethazaine CAM (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.131.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.024 0.012 0.006 0 90-388 (additive effect)100 − − − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − −25 − − − − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − − + +6.25 − − − − − − − − − − − − + + + + 3.13 − − − − − − − − − − −− + + + + 0 − − − − − − − − − − − + + + + 90-390 (additive effect) 100 −− − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 − −− − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − − + + 6.25 −− − − − − − − − − − − + + + + 3.13 − − − − − − − − − − − − + + + + 0 − −− − − − − − − − − + + + +

[0143] TABLE 43 Oxethazaine CAM (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.131.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.024 0.012 0.006 0 90-392 (additive effect)100 − − − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − −25 − − − − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − − − −6.25 − − − − − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − − − − − − − − −− + + + 0 − − − − − − − − − − − − + + + 90-394 (additive effect) 100 − −− − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 − − −− − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − − − + 6.25 − −− − − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − − − − − − − − − + + + + 0 − − −− − − − − − − − − + + +

[0144] TABLE 44 Oxethazaine CAM (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.131.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.024 0.012 0.006 0 90-397 (synergism) 100 − −− − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 − − −− − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − − − + 6.25 − −− − − − − − − − − + + + + + 3.13 − − − − − − − − − − − + + + + + 0 − − −− − − − − + + + + + + + 90-407 (additive effect) 100 − − − − − − − − − −− − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − −− − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − + + + 6.25 − − − − − − − − − −− − + + + + 3.13 − − − − − − − − − − − − + + + + 0 − − − − − − − − − −− + + + +

[0145] TABLE 45 Oxethazaine CAM (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.131.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.024 0.012 0.006 0 90-411 (synergism) 100 − −− − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 − − −− − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − − − + 6.25 − −− − − − − − − − − − − − + + 3.13 − − − − − − − − − − − − − + + + 0 − − −− − − − − − − − − + + + 90-414 (additive effect) 100 − − − − − − − − − −− − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − −− − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − − − + 6.25 − − − − − − − − − −− − − + + + 3.13 − − − − − − − − − − − − − + + + 0 − − − − − − − − − − −− + + +

[0146] TABLE 46 90-428 (synergism) Oxethazaine CAM (μg/ml) (μg/ml) 10050 25 12.5 6.25 3.13 1.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.024 0.012 0.006 0 100 −− − − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − − − − 25 − −− − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − + + + 6.25 −− − − − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − − − − − − − − − + + + + 0 − −− − − − − − − − − + + + +

[0147] TABLE 47 Oxethazaine RXM (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.131.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0 NCTC11637 (additive effect) 100 − − − − − −− − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − −12.5 − − − − − − − − − − − − − 6.25 − − − − − − − − − − − + + 3.13 − − −− − − − − − − − + + 0 − − − − − − − − − − + + NCTC11639 (additiveeffect) 100 − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 −− − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − + + 6.25 − − − − − −− − − + + + + 3.13 − − − − − − − − − + + + + 0 − − − − − − − − + + + +

[0148] TABLE 48 Oxethazaine RXM (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.131.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0 NCTC11916 (additive effect) 100 − − − − − −− − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − −12.5 − − − − − − − − − − − − + 6.25 − − − − − − − − − − − + + 3.13 − − −− − − − − − − − + + 0 − − − − − − − − − − + + ATCC49503 (additiveeffect) 100 − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 −− − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − + 6.25 − − − − − −− − − − − − + 3.13 − − − − − − − − − − − − + 0 − − − − − − − − − − − +

[0149] TABLE 49 Oxethazaine RXM (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.131.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0 EH 12 (additive effect) 100 − − − − − − − −− − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − − 12.5− − − − − − − − − − − − − 6.25 − − − − − − − − − − − + + 3.13 − − − − −− − − − − − + + 0 − − − − − − − − − − + + EH 13 (additive effect) 100 −− − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − −− − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − + 6.25 − − − − − − − − − − − + +3.13 − − − − − − − − − − − + + 0 − − − − − − − − − − + +

[0150] TABLE 50 Oxethazaine RXM (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.131.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0 EH 16 (synergism) 100 − − − − − − − − − − −− − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − −− − − − − − − − − + 6.25 − − − − − − − − − − − + + 3.13 − − − − − − − −− + + + + 0 − − − − − − − − − + + + EH 26 (additive effect) 100 − − − −− − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − −− − 12.5 − − − − − − − − − − − − + 6.25 − − − − − − − − − − + + + 3.13 −− − − − − − − − − + + + 0 − − − − − − − − − + + +

[0151] TABLE 51 Oxethazaine RXM (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.131.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0 89-355 (additive effect) 100 − − − − − − − −− − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − − 12.5− − − − − − − − − − − − − 6.25 − − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − −− − − − − + + + 0 − − − − − − − − − + + + 89-357 (additive effect) 100 −− − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − −− − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − + 6.25 − − − − − − − − − − − + +3.13 − − − − − − − − − − − + + 0 − − − − − − − − − − + +

[0152] TABLE 52 Oxethazaine RXM (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.131.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0 89-360 (additive effect) 100 − − − − − − − −− − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − − 12.5− − − − − − − − − − + + + 6.25 − − − − − − − − − + + + + 3.13 − − − − −− − − − + + + + 0 − − − − − − − − + + + + 90-375 (additive effect) 100 −− − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − −− − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − + 6.25 − − − − − − − − − − − + +3.13 − − − − − − − − − − − + + 0 − − − − − − − − − − + +

[0153] TABLE 53 Oxethazaine RXM (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.131.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0 90-384 (synergism) 100 − − − − − − − − − − −− − 100 − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 − − −− − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − + + 6.25 − − − − − − − −− − + + + 3.13 − − − − − − − − − + + + + 0 − − − − − − − − + + + +90-388 (synergism) 100 − − − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − −− − − 25 − − − − − − − − − − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − + + 6.25 −− − − − − − − − − − + + 3.13 − − − − − − − − − + + + + 0 − − − − − − − −− + + +

[0154] TABLE 54 Oxethazaine RXM (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.131.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0 90-390 (additive effect) 100 − − − − − − − −− − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − − 12.5− − − − − − − − − − − − + 6.25 − − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − −− − − − − + + + 0 − − − − − − − − − + + + 90-392 (additive effect) 100 −− − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − −− − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − − 6.25 − − − − − − − − − − − + +3.13 − − − − − − − − − − + + + 0 − − − − − − − − − − + +

[0155] TABLE 55 Oxethazaine RXM (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.131.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0 90-394 (additive effect) 100 − − − − − − − −− − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − − 12.5− − − − − − − − − − − + + 6.25 − − − − − − − − − − + + + 3.13 − − − − −− − − − − + + + 0 − − − − − − − − − + + + 90-397 (synergism) 100 − − − −− − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − −− − 12.5 − − − − − − − − − − − − + 6.25 − − − − − − − − − − + + + 3.13 −− − − − − − − − + + + + 0 − − − − − − − − + + + +

[0156] TABLE 56 Oxethazaine RXM (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.131.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0 90-407 (additive effect) 100 − − − − − − − −− − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − − 12.5− − − − − − − − − − + + + 6.25 − − − − − − − − − + + + + 3.13 − − − − −− − − − + + + + 0 − − − − − − − − + + + + 90-411 (additive effect) 100 −− − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − −− − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − − + 6.25 − − − − − − − − − − − + +3.13 − − − − − − − − − − − + + 0 − − − − − − − − − − + +

[0157] TABLE 57 Oxethazaine RXM (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.5 6.25 3.131.56 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0 90-414 (additive effect) 100 − − − − − − − −− − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − − − − − − − 12.5− − − − − − − − − − − − + 6.25 − − − − − − − − − − − + + 3.13 − − − − −− − − − − − + + 0 − − − − − − − − − − + + 90-428 (additive effect) 100 −− − − − − − − − − − − − 50 − − − − − − − − − − − − − 25 − − − − − − − −− − − − − 12.5 − − − − − − − − − − − + + 6.25 − − − − − − − − − − + + +3.13 − − − − − − − − − − + + + 0 − − − − − − − − − + + +

[0158] As is evident from the results of antimicrobial activity test 6,further synergism and additive effect for anti-H. pylori activity wererecognized when oxethazaine was used in combination with an antibiotic.

[0159] The results are shown in the following Table.

[0160] Effect of Combined Use of Oxethazaine and Each AntimicrobialAgent Compound AMPC CAM RXM syner-  0 strains/15 strains  5 strains/21strains  4 strains/22 strains gism additive 10 strains/15 strains 17strains/21 strains 19 strains/22 strains effect

[0161] From these results, the further excellent H. pylori-eradicatingeffect of the present invention comprising combined use of oxethazaineand an antibiotic is evident, and when both the compounds are used incombination, the dose of the antibiotic administered can be reduced, andthus a reduction in side effects can be expected.

ANTIMICROBIAL ACTIVITY TEST 7

[0162] Anti-H. pylori Activity of Oxethazaine Used in Combination with aH₂-receptor Antagonist

[0163] 1. Method

[0164] The synergism of oxethazaine used in combination with cimetidineor famotidine was examined in the same manner as in antimicrobialactivity test 1, using the checker board method.

[0165] 2. Results

[0166] Hereinafter, the results are shown for each strain in the samemanner as in antimicrobial activity test 3.

[0167] 1) Cimetidine TABLE 58 Oxethazaine Cimetidine (μg/ml) (μg/ml) 10050 25 12.5 6.25 0 NCTC11637 (additive effect) 800 − − − − − + 400 − −− + + + 200 − − − + + + 0 − − − + + NCTC11639 (additive effect) 800 − −− − + + 400 − − − + + + 200 − − − + + + 0 − − − + + NCTC11916 (additiveeffect) 800 − − − − + + 400 − − − + + + 200 − − − + + + 0 − − − + + EH12 (additive effect) 800 − − − − − − 400 − − − − − + 200 − − − − + + 0 −− − + +

[0168] TABLE 59 Oxethazaine Cimetidine (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 0 EH 13 (additive effect) 800 − − − − − − 400 − − − − − + 200 − −− + + + 0 − − − + + EH 16 (additive effect) 800 − − − − − + 400 − − −− + + 200 − − − − + + 0 − − − + + EH 26 (additive effect) 800 − − −− + + 400 − − − + + + 200 − − − + + + 0 − − − + + 89-355 (additiveeffect) 800 − − − − − − 400 − − − − − + 200 − − − − + + 0 − − − − +

[0169] TABLE 60 Oxethazaine Cimetidine (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 0 89-360 (additive effect) 800 − − − − + + 800 − − − − + + 400 − −− + + + 200 − − − + + + 0 − − + + + 90-384 (additive effect) 800 − − −− + + 400 − − − + + + 200 − − − + + + 0 − − − + + 90-390 (additiveeffect) 800 − − − − + + 400 − − − + + + 200 − − − + + + 0 − − − + +90-392 (additive effect) 800 − − − − − + 400 − − − − + + 200 − − − − + +0 − − − + +

[0170] TABLE 61 Oxethazaine Cimetidine (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 0 90-394 (additive effect) 800 − − − − + + 400 − − − + + + 200 − −− + + + 0 − − − + + 90-397 (additive effect) 800 − − − − + + 400 − −− + + + 200 − − − + + + 0 − − − + + 90-407 (additive effect) 800 − − −− + + 400 − − − + + + 200 − − − + + + 0 − − − + + 90-411 (additiveeffect) 800 − − − − + + 400 − − − + + + 200 − − − + + + 0 − − − + +

[0171] TABLE 62 Oxethazaine Cimetidine (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 0 90-414 (additive effect) 800 − − − − − − 400 − − − − − + 200 − −− − + + 0 − − − + + 90-428 (additive effect) 800 − − − − + + 400 − −− + + + 200 − − − + + + 0 − − − + +

[0172] TABLE 63 Oxethazaine Famotidine (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 0 NCTC11637 (additive effect) 800 − − − − + + 400 − − − + + + 200 −− − + + + 0 − − − + + NCTC11639 (additive effect) 800 − − − − − + 400 −− − + + + 200 − − − + + + 0 − − − + + NCTC11916 (additive effect) 800 −− − − + + 400 − − − + + + 200 − − − + + + 0 − − − + + EH 12 (additiveeffect) 800 − − − − + + 400 − − − + + + 200 − − − + + + 0 − − − + +

[0173] TABLE 64 Oxethazaine Famotidine (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 0 EH 13 (additive effect) 800 − − − − + + 400 − − − + + + 200 − −− + + + 0 − − − + + EH 16 (additive effect) 800 − − − − + + 400 − −− + + + 200 − − − + + + 0 − − − + + EH 26 (additive effect) 800 − − −− + + 400 − − − + + + 200 − − − + + + 0 − − − + + 89-357 (additiveeffect) 800 − − − − + + 400 − − − + + + 200 − − − + + + 0 − − − + +

[0174] TABLE 65 Oxethazaine Famotidine (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 0 89-360 (additive effect) 800 − − − − + + 400 − − − + + + 200 − −− + + + 0 − − + + + 90-390 (additive effect) 800 − − − − + + 400 − −− + + + 200 − − − + + + 0 − − − + + 90-392 (additive effect) 800 − − −− + + 400 − − − + + + 200 − − − + + + 0 − − − + + 90-397 (additiveeffect) 800 − − − − + + 400 − − − + + + 200 − − − + + + 0 − − − + +

[0175] TABLE 66 Oxethazaine Famotidine (μg/ml) (μg/ml) 100 50 25 12.56.25 0 90-407 (additive effect) 800 − − − − + + 400 − − − + + + 200 − −− + + + 0 − − − + + 90-411 (additive effect) 800 − − − − + + 400 − −− + + + 200 − − − + + + 0 − − − + + 90-414 (additive effect) 800 − − −− + + 400 − − − + + + 200 − − − + + + 0 − − − + +

[0176] As is evident from the result of antimicrobial activity test 7mentioned above, further synergism and additive effect for anti-H.pylori activity were recognized when oxethazaine was used in combinationwith the H₂-receptor antagonist.

[0177] The results are e shown in the following Table.

[0178] Effect of Combined Use of Oxethazaine and H₂-receptor AntagonistCompound Cimetidine Famotidine additive effect 18 strains/18 strains 15strains/15 strains

[0179] From these results, the further excellent H. pylori-eradicatingeffect of the present invention comprising combined use of oxethazaineand the H₂-receptor antagonist is evident, and when both the compoundsare used in combination, the dose of the H₂-receptor antagonistadministered can be reduced, and thus a reduction in side effects can beexpected.

[0180] Next, the antimicrobial activity (MIC, μg/ml) of oxethazaine andstructures analogues against Gram-positive bacteria, which was evaluatedin a usual manner, is shown below. Compound Strain No. Oxethazaine (A)(B) (C) (D) S. aureus 12.5 >100 >100 >100 >100 FDA 209-P S. epidermidis6.25 >100 >100 >100 >100 ATCC 12228 E. faecalis 25 >100 >100 >100 >100RIMD 3116001

[0181] Compound (A); ethyl p-aminobenzoate

[0182] Compound (B); ethyl piperidinoacetylaminobenzoate

[0183] Compound (C); procaine hydrochloride

[0184] Compound (D); lidocaine injection

[0185] From the results described above, it is evident that oxethazaineexhibits excellent effect not only on H. pylori but also onGram-positive bacteria.

[0186] Finally, the results of an acute toxicity test of oxethazaine areshown below.

[0187] Acute Toxicity Test

[0188] A toxicity test was conducted by orally administering a singledose into 7- to 8-weeks old Slc:SD rats and Slc:ICR mice, each groupconsisting of 5 females and 5 males (medium; physiological saline).

[0189] LD₅₀ values are shown in the following table. Animal Mouse RatSex ♂ ♀ ♂ ♀ LD₅₀(mg/kg) 1231 1000 1000 1071 (Oral administration) ˜2000˜2000

[0190] These LD₅₀ values are about 5000 times as high as clinical doses(15 to 40 mg/day) in oral administration, indicating extremely highsafety.

[0191] Further, as is evident from Examples mentioned above, thecompound of the present invention has H. pylori-eradicating action equalto or higher than that of antibiotics, and is thus useful as anantimicrobial agent for preventing, ameliorating and treating pepticulcer and gastritis attributable to H. pylori i, particularly recurringulcer and recurring gastritis.

[0192] Specifically, it can be administered for a long time as a highlysafe antimicrobial agent which can prevent, improve and treat pepticulcer and gastritis by inhibiting gastric acid secretion, and alsorecurring ulcer and gastritis caused by H. pylori , withoutsimultaneously using antibiotics.

[0193] The dose of the compound of the present invention administered asan antimicrobial agent to a patient varies depending on symptoms, thetype and progress of gastric ulcer and gastritis, the age, and cardiac,hepatic and renal functions of the patient, and is not particularlylimited. However, it is preferable that oxethazaine is administered toan adult usually in a dose of 1 to 100 mg/day, more preferably 15 to 40mg/day. Further, when oxethazaine and PPI are used in combination,oxethazaine is combined with PPI in a dose of 0.01 to 100 mg/day,preferably 0.1 to 80 mg, more preferably 1.0 to 60 mg, furtherpreferably 5 to 40 mg, and both the compounds are orally administered.

[0194] As the administration form, for example, powder, fine particles,granules, tablets and capsules etc. maybe proposed. In pharmaceuticalmanufacturing, the pharmaceutical preparation can also be produced in ausual manner by using usual pharmaceutical carriers, but according to amethod described in JP-A 1-290628 or JP-A 2-22225, PPI can be formedinto a more stable pharmaceutical preparation.

[0195] As described above, the excellent anti-H. pylori effect andsafety of the present invention were proved.

1. An antimicrobial agent comprising oxethazaine represented by thefollowing formula:

as an active ingredient.
 2. An antimicrobial composition comprising theoxethazaine as claimed in claim 1 and a proton pump inhibitor as activeingredients.
 3. The composition as claimed in claim 2, wherein theproton pump inhibitor is at least one selected from the group consistingof rabeprazole (I),2-[4-(3-methoxypropoxy)-3-methylpyridine-2-yl]methylthio-1H-benzimidazole(II), omeprazole (III), lansoprazole (IV) and pantoprazole (V)represented by the following chemical formulae and pharmacologicallyacceptable salts thereof.


4. The composition as claimed in claim 2, which comprises oxethazaineand rabeprazole (I) or its pharmacologically acceptable salt as activeingredients.
 5. The composition as claimed in claim 2, which comprisesoxethazaine and2-[4-(2-methoxypropoxy)-3-methylpyridine-2-yl]methylthio-1H-benzimidazole(II) or its pharmacologically acceptable salt as active ingredients. 6.The composition as claimed in claim 2, which comprises oxethazaine andomeprazole (III) or its pharmacologically acceptable salt as activeingredients.
 7. The composition as claimed in claim 2, which comprisesoxethazaine and lansoprazole (IV) or its pharmacologically acceptablesalt as active ingredients.
 8. The composition as claimed in claim 2,which comprises oxethazaine and pantoprazole (V) or itspharmacologically acceptable salt as active ingredients.
 9. Anantimicrobial composition comprising the oxethazaine as claimed in claim1 and an antibiotic as active ingredients.
 10. The composition asclaimed in claim 9, in which the antibiotic is at least one selectedfrom the group consisting of ampicillin, amoxicillin, ofloxacin,erythromycin, roxithromycin, clarithromycin, minocycline andmetronidazole.
 11. An antimicrobial composition, which comprises theoxethazaine as claimed in claim 1 and a H₂-receptor antagonist or itspharmacologically acceptable salt as active ingredients.
 12. Thecomposition as claimed in claim 11, wherein the H₂-receptor antagonistor its pharmacologically acceptable salt is at least one selected fromthe group consisting of cimetidine, ranitidine hydrochloride andfamotidine.
 13. A method of treating a disease caused by Helicobacterpylori, which comprises the step of administering an effective amount ofthe oxethazaine as claimed in claim 1 to a patient suffering from thedisease.